多聚甲醛固定(甲醛固定标本的原理)

在流式细胞术实验中，往往需要检测细胞内和细胞核抗原，因此需要固定和破膜。本文介绍了几种经典的固定破膜方法及注意事项。

固色剂多聚甲醛

原理：赖氨酸残基之间发生交联

浓度：0.5 ~ 4%

保存时间：固定后可在PBS中稳定1 ~ 2周。

乙醇

原理：蛋白质是通过沉淀和失活固定的，所以蛋白质可能会聚焦，结合位点可能会丢失。同时能溶解脂质，破膜。

浓度：70%乙醇或甲醇

保存时间：4或-20保存数月。

1、用于做Western 或ELISA的一抗可否用于流式细胞术？

看你的说明书怎么说了。不说就不能做流媒体。需要单独购买。

2、请问流式细胞术单抗直接荧光需要几种对照？

首先确认你使用的直接抗体的荧光染料，然后确认抗体的来源物种，选择相应的同型对照。比如你现在要检测小鼠淋巴细胞表面的CD4抗原，荧光染料是FITC，抗体来源是鼠IgG1亚型，即鼠抗鼠CD4-FITC (IgG1)，你需要的同型对照应该是鼠IgG1-FITC，一般抗体描述会写的很清楚。

3、6孔板的细胞量能否做流式呀？

对于6孔板，每个孔的表面积为10 cm2，充满时的数量从5*10到5*10到6不等。6孔板绝对没问题！即使是24孔板也能正常工作。但是要准备更多的正常细胞用于调试仪器参数。